靶向Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药

摘要 目的：探讨靶向抗凋亡蛋白Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的作用及重定位Bcl-2靶向抑制剂用于克服耐药的可行性。方法：通过药物浓度梯度递增法构建非小细胞肺癌多代EGFR-TKIs耐药株,根据亲本细胞和多代EGFR-TKIs耐药的非小细胞肺癌细胞的RNA-seq数据筛选出潜在耐药相关基因Bcl-2,通过Western blot 检测其在耐药细胞中的蛋白水平。为了探讨Bcl-2诱导耐药的作用,采用siRNA干扰和使用Bcl-2的抑制剂ABT199抑制Bcl-2,通过CCK8法、IncuCyte实时监测和Western blot等方法检测其对亲本和耐药细胞的细胞活力、药物敏感性、增殖和凋亡的影响。随后使用奥希替尼分别处理亲本及耐药细胞,通过Western Blot检测NRF2受到药物作用后及在耐药细胞中的蛋白水平,并以临床公共数据库分析辅助验证。使用siRNA干扰或NRF2抑制剂ML385敲低或抑制NRF2功能,借助Western Blot和CCK8法检测其对Bcl-2表达水平及对EGFR-TKI敏感性的影响;通过加入NRF2的激动剂Ki696探究其对Bcl-2的诱导作用、对EGFR-TKI敏感性的影响及取消靶向Bcl-2逆转耐药的作用。结果：Bcl-2在EGFR-TKIs耐药细胞中上调;敲低或抑制Bcl-2后,可选择性抑制耐药细胞的生长和活力,并诱导凋亡,且能逆转包括第三代药物奥希替尼在内的多代EGFR-TKIs耐药;EGFR-TKI可在敏感细胞中诱导NRF2的上调,且耐药细胞中上调的Bcl-2受NRF2调控。结论：EGFR-TKIs耐药细胞通过上调抗凋亡分子Bcl-2获得耐药,该分子的上调受NRF2的调控,靶向Bcl-2则可以逆转耐药。     

巨噬细胞装载纳米颗粒用于药物递送

目的:活细胞药物递送系统具有主动靶向至肿瘤部位,防止被免疫系统清除等诸多优势。本文提供了一种巨噬细胞负载纳米颗粒的递送方法,并探讨不同载药量对巨噬细胞的活性以及运动性的影响。方法:通过超声乳化法制备包载阿霉素的DOX@PLGA纳米颗粒。纳米粒度分析仪测量粒径和表面电位,透射电镜观察纳米颗粒形态。将DOX@PLGA纳米颗粒与巨噬细胞共同孵育,即得到负载DOX@PLGA纳米颗粒的巨噬细胞用以药物递送。然后通过CCK-8法、LDH法以及细胞迁移实验检测不同载药量情况下细胞活力水平、细胞损伤程度以及细胞运动性。结果:制备的DOX@PLGA纳米颗粒呈圆形或椭圆形,粒径为109.2±2.3 nm;表面电位为-45.0±2.0 m V;载药量为4.61%。当单个巨噬细胞负载0.15 pg DOX时细胞存活率为:71.5±4.4(%);细胞损伤率为:26.3±1.8(%);迁移率为:61.6±5.7(%)。结论:成功制备巨噬细胞负载DOX@PLGA纳米颗粒的递药系统,载药量适当的情况下载体细胞依然具有良好的活性和运动性。     

人源化YKL-40中和抗体（Rosazumab） 体外阻断血管再生

摘要 目的：血管再生是实体肿瘤的生长和恶性转移的一个必须病理过程,阻断这一过程能够有效阻止恶性肿瘤的发生发展。YKL-40是血管再生因子,能刺激肿瘤的血管再生。本文探讨了一个原创性人源化抗YKL-40单克隆抗体（Rosazumab, 命名为洛沙单抗）阻断YKL-40血管生成的体外功能。方法：Western Blot检测洛沙单抗对分泌和重组YKL-40蛋白的特异性结合;Western Blot及考马斯亮蓝染色检测该抗体的抗体特异性和纯度;Live/Dead染色试验检测抗体的细胞毒性。以人微血管内皮细胞（Human microvascular endothelial cells, HMVECs）为研究对象,引入重组YKL-40蛋白或脑胶质瘤细胞（Glioblastoma serum-differentiated cells, GSDCs）的条件培养基进行培养。Transwell试验检测该抗体对HMVECs迁移力的影响,并用Matrigel试验检测对微管形成的作用。结果：洛沙单抗可特异性结合YKL-40,考马斯亮蓝染色进一步证明其纯度及特异性。体外血管再生试验包括细胞迁移力和微管形成证明该抗体可以有效中和重组YKL-40蛋白及肿瘤细胞条件培养基中的YKL-40,抑制HMVECs的迁移和血管形成。结论：洛沙单抗是首创的人源化中和YKL-40的抗体,其特异性高,细胞毒性低,能显著抑制YKL-40血管再生功能,为下一步体内试验奠定基础。本研究可为YKL-40诱导的肿瘤血管生成及恶性肿瘤转移提供一种新的治疗手段。